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      單寧含量檢測試劑盒說明書

      更新時間:2023-07-06   點擊次數:370次

      規格:100T/96S

      產品內容:

      提取液:液體100mL×2瓶,4℃保存。試劑一:粉劑×1瓶,常溫保存。


       

       

      微量法


      標準品:粉劑×1支,10mg單寧酸,4℃保存。臨用前加入1.175mL提取液溶解為5000nmol/mL的標準液。

      產品說明:

      單寧又稱植物多酚,是一類廣泛存在于植物體內的多元酚化合物。單寧可作為潛在的生物標記物;與蛋白質結合的能力又稱為收斂性或澀性。其收斂性是多種生理活性的基礎,如止血、抗腫瘤、抗衰老等生理活性,也是影響產品口感的因素之一。

      根據光譜特性,單寧在275nm下有較強的紫外吸收,通過利用活性炭能夠特異吸附單寧的性質來檢測單寧含量。

      自備實驗用品及儀器:

      紫外分光光度計/酶標儀、離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96UV板和蒸餾水。

      測定操作:

      1、樣本處理:

      將樣本烘干至恒重,粉碎,過40目篩之后,稱取約0.05g,加入1mL提取液,封口膜封口防止液體濺出,于70℃水浴提取30min,期間可搖晃數次。12000rpm,25℃,離心10min,取上清,用提取液定容至1mL,待測。

      2、操作步驟:

      1)紫外分光光度計/酶標儀預熱30min,波長調至275nm。蒸餾水調零。

      25000nmol/mL標準液用提取液稀釋為6.25、3.125、1.5625、0.78625、0.4、0.2nmol/mL標準溶液。

      3)加樣表:

      試劑名稱

      測定管

      對照管

      標準管

      空白管

      試劑一

      大約5-7mg

      -

      -

      大約5-7mg

      蒸餾水

      -

      -

      -

      0.5mL


      標準溶液

      -

      -

      0.5mL

      -

      樣品

      0.5mL

      0.5mL

      -

      -

      充分混勻震蕩5min,13000g 離心20min。取200µL上清液測定275nm下的吸光度,分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管,計算?A測定=A對照管-A測定管,A標準=A標準管-A空白管。

      單寧含量計算:

      1、標準曲線的繪制:

      以標準溶液的濃度為x軸,以A標準為y軸,繪制標準曲線,得到方程y=kx+b,將?A測定帶入方程中得到xnmol/mL

      2、單寧含量計算:

      1. 按蛋白濃度計算:

      單寧含量(nmol/mg prot=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr。

      2. 按樣本鮮重計算:

        nmol/g =x×V   ÷W =x÷W 。Cpr 樣品蛋白濃度,mg/mL(蛋白濃度需重新用PBS提取測定);W:樣品質量,g;V提?。?/span>

      提取液體積,2mL。

      注意事項:

      1、 ?A大于1.5時,建議將樣品上清液用提取液稀釋更大倍數后測量;?A過小時,建議減少稀釋倍數或增加樣品質量來測定。


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