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      大鼠(sVCAM-1)ELISA檢測試劑盒(進口分裝)

      更新時間:2018-06-29      瀏覽次數:2009

      大鼠(sVCAM-1)ELISA檢測試劑盒(進口分裝)

      大鼠可溶性血管內皮細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒

      英文名稱:Rat sVCAM-1 ELISA Kit
      實驗類型:夾心法
      檢測范圍:31.25 ng/mL – 1000 ng/mL
      低檢測限:1.0 ng/mL
      應用范圍:血清、血漿、組織勻漿、細胞培養物上清或其它相關液體(本產品僅供實驗室科研及非臨床用途)

      實驗原理

      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大鼠可溶性血管內皮細胞粘附分子1(sVCAM-1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠可溶性血管內皮細胞粘附分子1(sVCAM-1)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

       

       

       

      大鼠可溶性血管內皮細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒組成

      試劑盒組成96孔配置48孔配置備注
      微孔酶標板8孔×12條8孔×6條 無
      標準品0.3mL×6管0.3mL×6管
      樣本稀釋液6mL3mL
      檢測抗體-HRP10mL5mL
      20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋
      底物A6mL3mL
      底物B6mL3mL
      終止液6mL3mL
      封板膜2張2張
      說明書1份1份
      自封袋1個1個

      備注:

      1. 標準品濃度依次為:1000、500、250、125、62.5、0 ng/mL

      2. 經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

       

       

       

      樣本處理及要求

      1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

      2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

      3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

      注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

       

       

       

      需要而未提供的試劑和器材

      1. 酶標儀(450nm)

      2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

      3. 37℃恒溫箱

      4. 蒸餾水或去離子水

       

       

       

      試劑準備

      試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

      20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

       

       

       

      操作步驟

      1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

      2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

      3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

      4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

      5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

      6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

      7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

       

       

       

      注意事項

      1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

      2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

      3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

      4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。

      5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

      6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

      7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

      8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

      9. 不能使用過期產品。

      10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

       

       

       

      洗板方法

      手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。根據需要,重復此過程數次。

      自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

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